La mutación del gen humano 29 de EGFR (Kit de detección de PCR en tiempo real) La intención de uso Este kit de prueba se utiliza para la detección cualitativa in vitro de mutaciones en los exones 18-21 del gen EGFR en muestras de los no-pacientes de cáncer de pulmón de células pequeñas (consulte la Tabla 1 para más detalles) El cáncer de pulmón se ha convertido en la primera causa de muertes por cáncer en el mundo, amenazando seriamente la salud humana. Entre los pacientes con cáncer de pulmón de células no pequeñas, el cáncer de pulmón representa aproximadamente el 80%. El EGFR es actualmente la más importante objetivo molecular para el tratamiento de células no pequeñas de cáncer de pulmón. La fosforilación de EGFR puede promover el crecimiento de células tumorales, diferenciación, la invasión, la metástasis, anti-apoptosis, y promover la angiogénesis tumoral. El EGFR inhibidor de tirosina quinasa (TKI) puede bloquear la vía de transducción de señales de EGFR EGFR autophosphorylation inhibiendo, lo que inhiben la proliferación y diferenciación de células tumorales, la promoción de la célula tumoral de la apoptosis, la reducción de la angiogénesis tumoral, etc., a fin de lograr la recuperación del tumor. La terapia dirigida [1]. Un gran número de estudios han demostrado que la eficacia terapéutica de EGFR-TKI está estrechamente relacionado con el estado de las mutaciones del gen EGFR, y específicamente puede inhibir el crecimiento de células tumorales con las mutaciones del gen EGFR [2~3]. El gen EGFR se encuentra en el brazo corto del cromosoma 7 (7p12), con una longitud total de 200 Kb, que consta de 28 exones. La mutación de la región se concentran en los exones 18-21, entre los que los codones 746-753 en el exón 19 están desaparecidos mutaciones representan aproximadamente el 45% de las mutaciones, y el L858R mutación en el exón 21 representa alrededor del 40 al 45% [4]. "La NCCN Directrices para el diagnóstico y tratamiento del cáncer de pulmón de células Non-Small" afirma claramente que la mutación del gen EGFR se requiere de pruebas antes de EGFR TKI-medicamento. Este kit de prueba se utiliza para guiar el medicamento de receptor de factor de crecimiento epidérmico (EGFR inhibidor de la tirosina cinasa-TKI) las drogas, y para proporcionar una base para la medicina personalizada para los pacientes sin cáncer de pulmón de células pequeñas. Este juego sólo se utiliza para la detección de mutaciones del gen EGFR no en pacientes con cáncer de pulmón de células pequeñas. Los resultados del ensayo clínico son para referencia solamente y no debe utilizarse como única base para el tratamiento individualizado de los pacientes. Los médicos deben combinar la condición del paciente, indicaciones y tratamiento de drogas, factores como la reacción y otros indicadores de las pruebas de laboratorio hacer un juicio global sobre los resultados. Principio de prueba Este kit de detección utiliza la solución de enriquecimiento de la PCR y los brazos (sistema de amplificación de mutación refractario) la tecnología y la sonda Taqman método combinado para detectar L858R, del 19, y otras Mutaciones de EGFR. Enriqueciendo la mutación de los sitios por PCR, la resolución y sensibilidad de detección son mejorar aún más. Las sondas Taqman están marcados con un reportero fluorophore FAM y quencher fluorophore BHQ2. Cuando la sonda está intacto, la señal fluorescente emitida por el grupo de reporter es absorbida por el grupo de enfriamiento; durante la PCR, el 5'-3' exonuclease actividad del enzima Taq se unirá y degrada la sonda, haciendo que el reportero grupo fluorescente y el temple fluorophore está separado de manera que el sistema de monitorización de fluorescencia pueden recibir la señal de fluorescencia. La solución de enriquecimiento de la PCR se reduce el tipo salvaje secuencia de fondo a través de la digestión de la enzima de restricción, y además mejora la resolución y sensibilidad de detección. Las características de los brazos método: ADN polimerasa Taq, que no tiene 3'-5' exonuclease actividad, puede reconocer específicamente el 3'final de la imprimación. Sólo cuando el 3'final de la imprimación es completamente igualado el fragmento en el sitio de mutación ampliarse normalmente. Cuando el 3'final de la imprimación es discordancia, no puede ser efectivamente amplificada. Por lo tanto, el uso de este método puede amplificar selectivamente el mutante secuencia, y la sonda Taqman es combinado con el producto amplificado para identificar la secuencia de destino de la mutación. La zona de detección seleccionado por el control interno de la solución de reacción es un segmento relativamente conservadora en el exón 2 de los derechos del gen EGFR, alrededor de 120 bp, como el control de calidad de los reactivos, el ADN de calidad, y la propia operación. Incluso si el ADN se degrada el control interno realmente pueden reaccionar ante el sistema. El importe efectivo de ADN en el gen. El sistema de detección contiene una cierta proporción de dUTP, la dNTP y uracil DNA glycosylase enzima (UDG), esta enzima (también llamado uracil-N-glycosylase o UNG enzima) puede interrumpir el PCR que contengan dUTP producto, lo que impide eficazmente la PCR la contaminación.